摘要：为快速繁殖多肉植物黑王子（Ｅｃｈｅｖｅｒｉａ‘Ｂｌａｃｋ　Ｐｒｉｎｃｅ’），建立其组织培养体系，试验采用黑王子叶片为外植体进行离体培养研究。结果表明：黑王子不经过愈伤组织的诱导阶段，即能从外植体上直接诱导分化出不定芽，其最适培养基为ＭＳ＋１。０ｍｇ／Ｌ　６－ＢＡ＋０。５ｍｇ／Ｌ　ＮＡＡ，诱导率高达９４。６％；最适的不定芽生根培养基为ＭＳ＋０。５ｍｇ／Ｌ　ＮＡＡ，生根率达９２。０％；试管苗的移栽成活率为９５。０％。本研究建立了黑王子快速、高效繁殖的组织培养体系，为其工厂化生产与利用提供了技术保障。

 

　多肉植物亦称多浆植物，主要指植物体的茎、叶或根具有发达的薄壁组织以贮藏水分和养分，在外形上呈肥厚多汁的植物［１］。多肉植物品种多样、色彩丰富、姿态优美、养护简单，可以丰富居室绿化、改善室内环境而受到越来越多的人们喜爱。多肉植物中，叶片为黑紫色的较为少见，景天科（Ｃｒａｓｓｕｌａｃｅａｅ）石莲花属（Ｅｃｈｅｖｅｒｉａ）的黑王子（Ｅ。‘Ｂｌａｃｋ　Ｐｒｉｎｃｅ’）即为其中的一种。

 

黑王子的茎较短，叶片以其亮丽的黑色和端正完美的莲座状堪称多肉植物“黑中之王”，植株成熟时有红色或紫红色的小花，呈聚伞花序，极具观赏价值［２］。黑王子在自然条件下可用扦插的方式进行繁殖，但繁殖率低，生长缓慢，而利用组织培养技术进行快速繁殖则可以不受上述因素限制。景天科多肉植物的离体组织培养已有一些报道，刘海军等对４种红景天属（Ｒ。ｈｏｄｉｏｌａ）的植物展开组织培养研究，获得了长鞭红景天（Ｒ。ｆａｓｔｉｇｉａｔａ）移栽成活的试管苗［３］；刘剑锋等建立了高山红景天（Ｒ。ｓａｃｈａｌｉｎｅｎｓｉｓ）的愈伤组织和植株再生的体系［４］；刑苗苗等以景天属（Ｓｅｄｕｍ）松塔景天（Ｓ。ｒｅｆｌｅｘｕｍ）和粗壮景天（Ｓ。ｓｐｅｃｔａｂｉｌｅ）的茎尖为外植体，建立了两者的离体繁殖体系［５］；刘芳等以劳尔（Ｓ。ｃｌａｖａ－ｔｕｍ）叶片为外植体，通过愈伤组织诱导、不定芽分化和生根、移栽等过程建立其快速繁殖体系［６］。据作者所知，目前还未见黑王子组织培养相关的研究报道。不同种类的多肉植物对培养基的要求不同。因此，本试验以黑王子叶片作为外植体研究不同浓度的植物生长调节剂对其组织培养各个阶段的影响，建立黑王子快速、高效的离体再生体系。

 

１　材料与方法

 

１．１　实验材料黑王子植株购自杭州丹诺园艺有限公司，种植于曲阜师范大学生命科学学院的温室。

 

１．２　实验方法

 

１．２．１　取材与消毒选取生长旺盛的黑王子叶片，用洗洁精在水中浸泡并用软毛刷清洗，除去表面灰尘，注意不伤到叶片．清洗干净后放到流水下冲洗３０ｍｉｎ，然后将其置于无菌操作台上用７０％酒精消毒３０ｓ，用无菌水冲洗２－３次，再加入少量吐温和０．１％升汞（ＨｇＣｌ２）溶液消毒４ｍｉｎ，并不断摇匀，使其充分消毒，最后用无菌水冲洗３－５次，每次１ｍｉｎ．将消毒后的外植体置于无菌滤纸上吸去多余的水分，备用。

 

１．２．２　不定芽的诱导

 

将处理好的外植体分别接种在含有不同浓度６－ＢＡ和ＮＡＡ的ＭＳ培养基中（表１），３５ｄ后统计不定芽的诱导率，诱导率＝（产生不定芽的外植体数／接种总外植体数）×１００％．每处理培养１０瓶，每瓶接种３个外植体，重复３次。

 

１．２．３　叶片不同部位诱导不定芽的培养

 

用无菌的手术刀将叶片切成基部、中部和顶部３部分，接种于诱导分化不定芽的培养基中，相同部位的外植体接种于同一瓶中，比较叶片不同部位的诱导情况．每处理培养１０瓶，每瓶接种３个外植体，重复３次。

 

１．２．４　生根培养

 

选取继代培养中较大且生长正常的不定芽置于不同浓度的生根培养基中（表３），培养３０ｈ后，统计生根率，生根率＝（产生根的不定芽数／总不定芽数量）×１００％，筛选最好的生根培养基。

 

１．２．５　培养方法以ＭＳ为基本培养基，每升培养基中添加３０ｇ蔗糖，６ｇ琼脂，ｐＨ值用ＮａＯＨ（１Ｍ）调为５．８－６．０，高压灭菌（１．１Ｍｐａ，１２１℃）１５ｍｉｎ．外植体接种后置于培养温度为２５±１℃、光照１２ｈ／ｄ、光照强度为１５００－２０００ｌｘ的培养室中培养．１．２．６　炼苗与移栽将生根良好的植株开瓶炼苗２－３ｄ，在培养瓶中加入少量无菌水．取出无菌苗后将根部清理干净，除去残留培养基，然后将其移栽于营养土与蛭石（ｖ／ｖ＝７∶３）混合土壤中．每天保持１２ｈ光照，温度维持在２５℃左右．３０ｄ后统计成活率，成活率＝（成活的植株数／移栽的总植株数）×１００％．