摘　要：选取小叶黄杨(Buxussinicavar.parvifoliaM.Cheng)为研究材料，研究干旱（轻度、中度和重度）、高温（40℃)以及干旱高温协同胁迫下对小叶黄杨生理生化指标的作用。主要测定其色素含量，光响应曲线，反射荧光光谱，发射荧光光谱，叶绿素荧光，保护酶的活性和非结构性碳的变化，以期阐明干旱高温胁迫下黄杨的生理生化响应机制，并进一步探讨不同程度干旱、高温和干旱高温协同胁迫响应的差异，进而为黄杨的抗逆栽培研究提供理论依据。

 

1　材料与方法

 

1.1　植物材料

 

3年生小叶黄杨盆景的实生苗，苗高约1m。选取长势良好的苗木栽植于盛有培养土花盆中，1株·盆-1，共计40盆。用浙江省当地黄壤土作为栽培土壤，经测定pH值为6.55。

 

1.2　实验处理

 

选取盆栽苗40盆，随机分为8组，其中4组用作干旱处理，4组干旱处理后再进行高温处理。

 

干旱胁迫：试验根据土壤含水量设置对照（CK,75%FC）、轻度干旱（LD,60%FC）、中度干旱（MD,40%FC）、重度干旱（SD,20%FC）4个水分梯度。每组处理5盆，每盆作为1个独立重复实验，每个梯度处理3天。

 

处理结束后取样，选取小叶黄杨盆景的枝条从上到下第3对完整的功能叶片。样品用液氮迅速冷冻，置于–80℃冰箱内保存，用于测定相关指标。高温胁迫：将对照组和每个干旱梯度胁迫后的苗木，放入人工气候箱（昼夜40°C/28°C，12h/12h，湿度40%RH，光照强度400μmol·m－2·s－1）进行高温胁迫处理2天。将对照组进行高温胁迫作为高温组，其它作为协同组。随后处理同上。

 

1.3　测定指标

 

1.3.1　色素含量的测定

 

选取成熟的黄杨叶片0.5g，剪碎后置于带盖的试管中，加5mL80%的丙酮，室温下遮光萃取48h，至叶片完全变白。将浸提液稀释10倍，于口径1cm石英比色杯中，分别测定470、645、663nm的OD值。按Lichtenthaler[1]的方法计算叶绿素a、叶绿素b和类胡萝卜素含量。每个处理取样3次。

 

 

1.3.2　糖含量的测定

 

可溶性糖含量：蒽酮比色法；淀粉含量的测定：将提取可溶性糖后的沉淀用高氯酸水解后，采用蒽酮硫酸法测定。

 

1.3.3　抗氧化酶活性测定

 

酶液提取方法：取0.2g样品液氮研磨细碎均匀，加入5mL磷酸缓冲溶液(50mmol·L–1，pH7.8)，混匀后10000×g离心10分钟(4°C)，上清液用于SOD、POD和CAT活性的测定。SOD活性测定参照Giannopolitis等[2]的方法；POD和CAT活性测定参照Kumari等[3]方法。

 

1.3.4　数据处理

 

所有数据均为六次重复的平均值±标准误差，将数据分为两组，一组为干旱胁迫，另一组为高温胁迫和干旱高温协同胁迫。采用Origin9软件进行统计分析和作图，采用One-WayANOVA对干旱胁迫和干旱高温协同胁迫分别进行检验。