防治甜瓜枯萎病药剂配方筛选及盆栽防效测定

 

　摘　要：以甜瓜枯萎病菌为试材，采用菌丝生长速率法和孢子萌发法从８种待选药剂中选出４种较优试剂进行复配试验，采用Ｗａｄｌｅｙ方法分别计算菌丝生长和孢子萌发的增效系数，确定最优配比并进行盆栽试验。结果表明：８种待选药剂中，２５％腈菌唑乳油和４５％咪鲜胺微乳剂对菌丝生长抑制效果较好，ＥＣ５０值分别为０．００１　２、０．００４　６ｍｇ·Ｌ－１；２５０ｇ·Ｌ－１嘧菌酯悬浮剂和２５％啶菌恶唑乳油对孢子萌发抑制效果较好，ＥＣ５０分别为０．０９２　２、３．２６３　２ｍｇ·Ｌ－１。

上述４种药剂按比例法两两混配，３０种组合中有２种配比对病菌菌丝生长及孢子萌发均为增效和加和作用，即咪鲜胺∶嘧菌酯＝４∶１，嘧菌酯∶啶菌恶唑＝２∶３。盆栽接种防效测定结果表明，上述２个组合每株浇灌１０ｍＬ浓度为１．０ｇ·Ｌ－１药液对甜瓜枯萎病防治效果分别为８０．４２％和７６．５７％，均显著高于单剂防效。为甜瓜枯萎病的防治药剂使用提供参考依据。

 

　甜瓜（Ｃｕｃｕｍｉｓ　ｍｅｌｏ　Ｌ．）在温带至热带地区广泛栽培，我国甜瓜产量占世界总产量的５０％。甜瓜枯萎病（Ｆｕｓａｒｉｕｍ　ｏｘｙｓｐｏｒｕｍｆ．ｓｐ．ｍｅｌｏ－ｎｉｓ）是导致甜瓜大量减产的病害之一。该病害在整个生育期均可发病，以开花、抽蔓到坐果期发病最盛［１］。发病初期，叶片下垂萎蔫，似缺水状，中午症状明显，早晚尚能恢复，数日后叶片呈褐色枯萎，不再恢复正常，中后期表现为维管束变褐，茎基部纵裂，病部流出深褐色胶状物，最终整株枯死［２］。病菌孢子可在土壤中大量存活［３］。

病害一旦发生，蔓延迅速，如不及时防治，会造成大片瓜田枯萎死亡，甚至绝收［４］。目前防治枯萎病常采用轮作、嫁接、生物防治等［５－７］方法，而化学防治也不可或缺。生产中常用咪鲜胺、恶霉灵等防治枯萎病，然而长期使用单一药剂会使病原菌对杀菌剂产生抗药性［８］，加大施药量后土壤中农药残留超标，进而危害人畜健康。该研究从药剂对病菌菌丝生长和孢子萌发的抑制作用入手，以期筛选到高效的杀菌混剂，从而减少杀菌剂的施用以及避免抗药性的产生。

 

１　材料与方法

 

１．１　试验材料

 

供试菌株：甜瓜枯萎病菌株（ＤＨＴＧ－７）由吉林农业大学植物病原实验室提供。

 

供试药剂：４３０ｇ·Ｌ－１戊唑醇悬浮剂（江苏丰山股份有限公司）；２５ｇ·Ｌ－１咯菌腈悬浮种衣剂（先正达作物保护有限公司）；２５％腈菌唑乳油（陕西上格之路生物科学有限公司）；４５％咪鲜胺乳油（深圳诺普信农化股份有限公司）；３０％恶霉灵水剂（潍坊天达植保有限公司）；２５０ｇ·Ｌ－１嘧菌酯悬浮剂（先正达作物保护有限公司）；１％申嗪霉素悬浮剂（上海农乐生物制品股份有限公司）；２５％啶菌恶唑乳油（沈阳科创化学品有限公司）。

 

１．２　试验方法

 

１．２．１　含药培养基的配制

 

将配制好的ＰＤＡ培养基分装于５０ｍＬ小瓶中，每瓶２７ｍＬ，灭菌备用。取０．１ｇ药剂放入１０ｍＬ无菌水中，配制成１×１０４　ｍｇ·Ｌ－１浓度的药液，再将其依次稀释为１×１０３、１×１０２、１×１０、１、１×１０－１　ｍｇ·Ｌ－１，将上述６个浓度药剂分别取３ｍＬ加至２７ｍＬ　４０℃的ＰＤＡ培养基中，充分混匀配制成混药平板。含药培养基最终浓度梯度为１×１０３、１×１０２、１×１０、１、１×１０－１、１×１０－２　ｍｇ·Ｌ－１，设３次重复，无药ＰＤＡ平板为对照。

 

１．２．２　菌丝生长速率法测定杀菌剂室内毒力

 

将培养７ｄ的病原菌用打孔器取直径为８ｍｍ的菌饼，接种于上述含药培养基上，做好标记后移至２６℃恒温培养箱倒置培养，当对照菌株直径超过４０ｍｍ后，采用十字交叉法测量处理菌落直径，并记录数据。采用ＶＢＡ程序［９］处理数据，进行线性回归分析。

 

１．２．３　孢子萌发法测定杀菌剂室内毒力

 

将培养７ｄ的病原菌用打孔器取直径为８ｍｍ的菌饼，在Ｂｉｌａｉ′ｓ培养液［１０］中放入３个菌饼振荡培养，２４ｈ后将病原菌的发酵液用无菌纱布过滤，将滤液离心弃上清液，加入无菌水将孢子浓度稀释至１０６个孢子·ｍＬ－１。取０．５ｍＬ孢子悬液均匀涂布于上述培养基，３次重复，黑暗培养２ｈ后观察孢子萌发情况，以芽管长度超过孢子长度１／２为萌发标准。对照孢子萌发率超过８０％时，放入４℃冰箱终止孢子萌发。在１０×１０显微镜下观察３００个孢子萌发状况，记录萌发与未萌发孢子数量，毒力计算和数据处理与上述相同。

 

１．２．４　联合毒力测定

 

分别筛选出对菌丝生长和孢子萌发抑制效果最佳的２种药剂按照１∶４、２∶３、１∶１、３∶２、４∶１比例混配，孢子萌发法和菌丝生长速率法测定各混配比例对病菌菌丝生长和孢子萌发的抑制作用。采用Ｗａｄｌｅｙ方法［１１］计算混配药剂的增效系数（ＳＲ），评价混配药剂的联合作用类型。

 

式中，ａ，ｂ分别代表Ａ药和Ｂ药在混剂中所占比例，ｏｂ为实测值，ｔｈ为理论值。当ＳＲ＜０．５为拮抗作用，０．５≤ＳＲ≤１．５为加和作用，ＳＲ＞。

 

１．５为增效作用。

 

１．２．５　盆栽防效测定

 

将混配后对菌丝生长和孢子萌发均为增效及加和作用的配比进行盆栽防效试验。灌根法接种３叶１心的甜瓜苗，每株浇灌１０ｍＬ浓度为１０６个孢子·ｍＬ－１的孢子悬液。将每种配比配置成３个浓度梯度，即０．５、１．０、１．５ｇ·Ｌ－１，接种２４ｈ后，每株浇灌１０ｍＬ药液，并设单剂及清水对照，单剂使用剂量为１．０ｇ·Ｌ－１。每处理２０株，３次重复，随机区组排列。

 

共施药２次，间隔期１５ｄ。２次药后１４ｄ调查发病情况，计算病情指数和防治效果，并对防治效果进行差异显著性分析。

 

１．２．６　病情分级调查

 

病害分级标准参照李怡等［１２］的方法。

 

０级：茎基部无褐变；

１级：茎基部褐变；

２级：茎基部１／２处褐变；

３级：茎基部２／３处以上褐变；

４级：茎基部到顶端所有维管束褐变，根部坏死。

 

１．３　数据分析

 

采用ＶＢＡ程序处理数据，进行线性回归分析，包括毒力回归方程ｙ＝ａｘ＋ｂ，相关系数（ｒ）及有效中浓度（ＥＣ５０），根据ＥＣ５０比较杀菌剂毒力大小；Ｄｕｎｃａｎ新复极差法［１３］检验盆栽防效差异显著性