玉扇(Haworthiatruncata)属百合科十二卷属小型肉质植物的软叶品种，学名截形十二卷，是一种珍稀名贵观赏植物，原产南非开普省［1］。玉扇外形奇特且可爱，具有极高的观赏价值，能吸收辐射，有较好的环保价值，深受广大消费群众的喜爱。

 

目前生产上多采用传统的嫁接、扦插(根插、叶插、芽插)、分株等方法获得成品植株，但植株生长缓慢，培养时间长，且受取材及培养条件的影响较大，无法满足市场需求而导致其价格居高不下［2-3］。

 

通过组织培养技术可以实现玉扇的离体快繁，缩短其生产周期。已有研究表明，以玉扇的花茎、叶片、侧芽作为外植体，通过具有特定激素配比的培养基培养，均能诱导出根、叶等器官，但不同外植体的诱导效应存在差异，取材不当影响组培成功率;另外从诱导分化的整个周期来看，目前的培养体系需3个月的培养时间，与传统方法所用周期相差不大［4-5］。

 

为解决玉扇组织培养过程中存在的成活率低、培养周期长等问题，该研究针对组织培养过程中的外植体选择、培养基激素配比进行研究，以期优化玉扇的组织培养条件，建立适宜于工厂化育苗的玉扇组培快繁技术体系。

 

 

1材料与方法

 

1.1试验材料

 

供试多肉植物玉扇由电子科技大学生命科学与技术学院植物基因组工程实验室提供。6-苄基腺嘌呤(6-BA)、萘乙酸(NAA)、6-糖基氨基嘌呤(KT)、噻苯隆(TDZ)及MS培养基所需各种化合物，均购自成都市科龙化工试剂厂。

 

1.2试验方法

 

1.2.1外植体的筛选

 

采用MS+1.0mg·L－16-BA+0.1mg·L－1NAA为基本培养基(MS培养基中加入3%白砂糖、0.7%琼脂、pH6.0);分别取玉扇的叶片、根尖、根颈组织，将其分为横切组织和纵切组织，每类组织接3瓶，每瓶接3块组织。

 

在愈伤组织生长5、10、15d时观察外植体的变化情况，测定愈伤组织的大小。培养方法及条件:外植体表面灭菌，经自来水流水冲洗5min后，75%酒精浸洗30s，再用0.1%升汞溶液处理10min，随后用无菌蒸馏水水冲洗4～5次。将经过消毒处理的材料均匀切成0.25cm2左右的小块置于培养皿中，将外植体随机接入培养基中，接种完成后在无菌培养间培养，培养温度为(25±2)℃，光照12h·d－1，光照强度2000lx［6］。

 

1.2.2诱导愈伤组织培养基的筛选

 

以玉扇根颈组织横切片为外植体，以MS+0.1mg·L－1NAA为基本培养基，分别添加0.0、0.5、1.0、1.5、2.0mg·L－1的KT、TDZ、6-BA，每处理均接种3瓶，每瓶接3块。在外植体生长5、10、15d时观察外植体的变化情况，测定愈伤组织的大小。培养方法与条件同1.2.1。

 

1.2.3诱导分化生茎培养基的筛选

 

以玉扇愈伤组织为外植体，MS+0.1mg·L－1NAA为基本培养基，分别添加0.0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5mg·L－16-BA，在愈伤组织生长5、15、30d时观察愈伤组织的变化及诱导茎叶生长情况，测定茎叶大小。

 

1.2.4生根培养基的筛选

 

以1.2.3阶段诱导出的已分化茎叶植株进行生根培养，以MS为基本培养基，分别添加0.0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mg·L－1NAA，在愈伤组织生长5、15、30d时分别观察植株生根的情况，测定根的大小。

 

1.3项目测定

 

在无菌条件下，采用直尺测量愈伤组织、茎叶及根的大小。

 

1.4数据分析

 

采用Excel2007、SPSS17.0软件对试验数据进行分析。数据以平均值±标准误差表示，采用邓肯氏法进行多重比较(P=0.05)分析。

 

2结果与分析

 

2.1不同外植体对愈伤组织的诱导效应由图1可知，经过愈伤组织诱导培养基培养后，玉扇叶片纵切片几乎无变化，而叶片横切片、根尖纵切片组织诱导培养10d时仍无变化，诱导培养15d之后，愈伤组织长度为0.55cm，出现少量愈伤组织，难以高效诱导愈伤组织;根尖横切片、根颈纵切片、根颈横切片在诱导培养10d后膨大泛黄，均有愈伤组织形成，其中根颈横切片的诱导效应明显高于其它组织，诱导培养10d后外植体长度为0.60cm，诱导培养15d后为0.75cm，均显著高于同阶段根尖横切片和根颈纵切片的外植体长度。从图2可以看出，以玉扇根颈组织作为外植体，经过诱导培养后，外植体均明显膨大泛黄，成功诱导出愈伤组织，且根颈组织横切片诱导愈伤组织的效应明显优于根颈纵切片。

 

2.2不同激素浓度对玉扇组培各阶段的影响
 

2.2.1不同激素浓度对外植体长度的影响由

 

表1、图3可知，经过不同激素配比的愈伤组织诱导培养基诱导培养后，不同浓度的KT、6-BA均能诱导玉扇外植体形成愈伤组织，且外植体长度明显高于对照;诱导培养10d后外植体均膨大泛黄，呈颗粒状聚集，诱导培养5d时则无明显变化，说明愈伤组织一般在诱导培养10d左右产生，且愈伤组织随培养天数增加逐渐增多;比较不同浓度KT、6-BA的诱导效应，其中以6-BA浓度为1.0mg·L－1时，诱导愈伤组织的效果最佳，诱导培养15d外植体长度达到0.75cm，显著高于6-BA其它浓度处理，也显著高于KT最佳浓度的诱导效应。不同浓度的TDZ则未能诱导形成愈伤组织，外植体长度几乎无变化。

 

2.2.2不同浓度6-BA对茎叶组织高度的影响

 

由表2、图4可知，添加不同浓度6-BA均能诱导出茎叶组织，且随6-BA浓度增加诱导效果越明显，诱导培养30d时除0.5mg·L－16-BA浓度处理与对照差异不显著外，其它浓度处理均显著高于对照;当6-BA浓度为2.0mg·L－1时茎叶组织诱导效果达最佳，为1.45cm，显著高于其它浓度处理。由表2还可知，诱导生茎的效果与培养时间有关，诱导培养5d时愈伤组织几乎无变化;诱导培养15d后，有丛生芽产生。

 

2.2.3不同浓度NAA对根组织长度的影响

 

由表3、图5可知，经不同浓度NAA诱导玉扇茎叶组织分化生根，当浓度为0.1mg·L－1时，诱导生根的效果最佳，根系长度明显高于对照及其它浓度处理。随NAA浓度增加诱导生根效应逐渐减弱，当浓度达到0.5mg·L－1NAA时不再诱导生根。由表3还可知，NAA浓度不同诱导玉扇茎叶组织生根的时间也有差异，当NAA浓度为0.1、0.2、0.3mg·L－1时，诱导培养5d即有根系产生;诱导培养到15d时，其它浓度及对照也有根系产生，但明显低于前者;而诱导培养到30d时，根系生长速度减缓，基本达到上限，此时根系长度多在3.0cm左右。